肉制品富含蛋白质、脂肪和矿物质等营养物质[1]，是人体所需营养的重要来源。随着社会的进步和人们生活水平的提高，消费者选择肉制品不仅为了摄取蛋白质等，同时希望其更营养、健康和便于携带。香肠是传统肉制品之一，具有携带方便、风味独特、营养丰富的特点[2]，深受广大消费者的青睐。近年来，随着生活节奏的加快，饮食不平衡、营养不均衡的问题日益突出[3]，越来越多的人崇尚更加健康的饮食观念，对营养均衡的食物需求量日益增长[4]。在这种情况下，复合香肠成为了肉制品新的发展方向，复合香肠包括不同种类的肉类复合、肉类与粮谷类、果蔬类、食用菌类、香辛料类复合等[5]，复合的主要目的是改善产品风味、控制脂肪含量、提高原料利用率。鱼肉是人类摄入蛋白质的重要来源，约占总摄入蛋白的25%[6]。草鱼（Ctenovyngodon idellus）是世界淡水养殖鱼类的重要种类，占全球淡水养殖鱼总产量约8%[7]，在水产品市场有重要的地位，草鱼具有低脂肪、高蛋白的营养特点，适宜与传统猪肉香肠制成复合香肠产品，添加鱼糜制作复合香肠比传统香肠脂肪含量更少，口感更为细腻[8]。
本研究以鱼肉与猪肉为原料进行复合调配，采用两段加热的方式进行加工，制成的复合香肠产品通过单因素试验研究其水分含量、总酸度、pH值、盐含量、氨基酸含量、水溶性蛋白质含量、质构变化以及感官品质变化，并以感官评分为指标进行正交试验，通过方差分析确立最佳的工艺条件。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
草鱼 家乐福集团公司；猪肉 沃尔玛百货有限公司；玉米淀粉 珠海南屏佳霖食品厂；香肠 广州皇上皇集团股份有限公司、河南双汇投资发展股份有限公司。
考马斯亮蓝G-250 广州美津生物科技有限公司；酚酞 天津市化学试剂厂；氢氧化钠 广州化学试剂厂；氯化钠 天津市福悬化学试剂厂；硝酸银 广州市金珠江化学有限公司化工厂；所用试剂均为分析纯。
1.2 仪器与设备
Hoffen-50傅里叶红外光谱仪 天津市嘉鑫海机械设备有限公司；L-3000 plus氨基酸自动分析仪 江苏华美辰仪器科技有限公司；FTC TMS-Pro质构仪 北京盈盛恒泰科技有限责任公司；HYG-C恒温摇床 太仓市试验设备厂；GL-16G离心机 上海安亭科技仪器厂。
1.3 方法
1.3.1 鱼肉与猪肉复合香肠制备
基本配方：鱼肉10～70 g、猪肉10～70 g、玉米淀粉5%、料酒2%、食盐0%～10%、蔗糖1.5%、味精0.3%、香辛料0.6%。
工艺流程：原料鱼肉、猪肉→预处理（去骨、去皮）→洗净→剔肉→漂洗→沥水→绞碎→混合→腌制→灌肠→结扎→加热→冷却→初成品→干燥→成品
操作要点：选择外表光滑、色泽均匀的鱼肉及猪肉，将猪肉的廋肉与肥肉部分分开备用；猪肉、鱼肉去除骨头、筋膜、淋巴等结缔组织后用流水进行清洗，把水沥干之后切成肉块；将猪廋肉与猪肥肉按6∶4的质量比进行混合，放入搅碎机制成肉糜，将鱼肉放入搅碎机制成肉糜，并将2 种肉糜进行混合；在混合好的肉糜中加入配料腌制12 h，腌制温度保持在4 ℃，腌制完毕后搅拌均匀灌入肠衣中并扎成15 cm的小节。将香肠进行蒸煮后冷却即得成品。
1.3.2 单因素试验设计
单因素试验设计方案如表1所示。
表1 复合香肠单因素试验因素水平
Table 1 Codes and levels of independent variables used in single factor experimens
水平鱼肉、猪肉质量比盐添加量/%一段加热温度/二段加热温度/℃一段加热时间/二段加热时间/11∶7090/1010/40 22∶6385/9520/60 33∶5580/9030/80 44∶4875/8540/100 55∶31070/8060/120
1.3.3 理化指标测定
1.3.3.1 水分含量
参照GB 5009.3—2016《食品安全国家标准 食品中水分的测定》[9]及GB/T 41366—2022《畜禽肉品质检测 水分、蛋白质、脂肪含量的测定 近红外法》[10]进行测定。
1.3.3.2 总酸度
参照GB 12456—2021《食品安全国家标准 食品中总酸的测定》[11]进行测定。
1.3.3.3 pH值
参照GB 5009.237—2016《食品安全国家标准 食品pH值的测定》[12]进行测定。
1.3.3.4 盐含量
参照GB 5009.44—2016《食品安全国家标准 食盐指标的测定》[13]进行测定。
1.3.3.5 总氨基酸含量
参照GB 5009.124—2016《食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定》[14]进行测定。
1.3.3.6 水溶性蛋白含量
采用考马斯亮蓝G-250比色法。称取2.00 g试样，加4 mL水研成匀浆。静置30 min，3 500 r/min离心20 min，吸取上清液1 mL于试管中，加入5 mL考马斯亮蓝试剂，充分混合，静置2 min后于595 nm波长处测定吸光度。以不同牛血清蛋白浓度为横坐标、其浓度所对应的吸光度为纵坐标绘制蛋白标准曲线。蛋白质含量按下式计算。
式中：m’为由试样吸光度从标准曲线上查得的蛋白质质量/µg；n为稀释倍数；m为称取试样质量/g。
1.3.3.7 质构特性
取3 cm×3 cm×1.5 cm香肠片，固定于质构仪底座上，使用P/36R探头进行测试。测试参数如下：测前速率2.5 mm/s，测试速率1.5 mm/s，测后速率1.0 mm/s，压缩比40%，触发力4 N。
1.3.4 感官评价
参照GB/T 22210—2008《肉与肉制品感官评定规范》[15]、SB/T 10279—2017《熏煮香肠》[16]进行评价，由10 名感官评价员对产品进行评分，评价标准及分值如表2所示。
表2 复合香肠感官评价标准
Table 2 Criteria for sensory evaluation of fish-pork sausage
评分项评价标准评分外观（20 分）肠衣完整，肉质均匀16～20肠衣完整，肉质不匀11～15肠衣变形，肉质不匀6～10肠衣破损，肉质不匀1～5色泽（25 分）有光泽，香肠呈淡红灰色21～25有光泽，香肠无明显颜色11～20无光泽，香肠颜色异常1～10组织（25 分）肉质紧密，富有弹性21～25肉质较松散，弹性较差11～20肉质松散，无弹性1～10风味（30 分）有鲜味，无明显腥味，咸度适中21～30有少许鲜味，略有腥味，咸度不适11～20无鲜味，有明显腥味，咸度不适1～10
1.3.5 正交试验设计
根据感官评价结果，设计L9（34）正交试验以优化工艺条件，具体试验方案见表3。
表3 正交试验方案
Table 3 Levels of independent variables used in orthogonal array design
因素水平123 A鱼肉、猪肉质量比3∶56∶24∶4 B盐添加量/%3810 C一段加热温度/二段加热温度/℃90/10085/9580/90 D一段加热时间/二段加热时间/min10/4020/6030/80
1.4 数据处理
每个指标均平行测定3 次，测定结果用平均值±标准差表示。数据显著性分析采用IBM SPSS Statistics 22.0软件处理，以P＜0.05为差异显著，作图采用Origin 9.0软件处理。
2 结果与分析
2.1 单因素试验结果
2.1.1 鱼肉、猪肉质量比对香肠品质的影响
由表4～5可知，鱼糜与猪肉糜搅碎后密度差别较小，混合较均匀，影响食盐溶解的因素有温度、颗粒大小等，相同的加工条件下鱼糜和肉糜保水性及盐分溶解性大致相同，因此鱼肉与猪肉比例变化对产品水分含量与盐分含量影响较小。鱼肉的脂肪含量低于猪肉脂肪含量，在加工及贮藏过程中油脂酸败的现象较少，这可能是鱼糜添加比例较多时pH值较高的原因[17]。香肠中鱼糜添加量与氨基酸含量成正比，这可能是由于腌制风干过程中鱼肉蛋白质易受蛋白酶的影响发生水解，氨基酸含量上升[18]。
表4 鱼肉、猪肉质量比对香肠理化指标的影响
Table 4 Effect of fish/meat ratio on physicochemical indexes of sausage
注：同列小写字母不同，表示差异显著（P＜0.05）。下同。
水溶性蛋白含量/（µg/g）1∶746.31±0.05a58.20±0.02a 5.17±0.01f2.20±0.15e10.90±0.01g1 576±6.13g 2∶642.92±0.11f57.00±0.02b 5.24±0.01e2.31±0.12c15.10±0.02f4 378±9.63f 3∶544.71±0.09c55.80±0.01c 5.32±0.00d2.50±0.13a21.60±0.02e4 789±8.15e 4∶443.23±0.12e54.10±0.01d 5.37±0.00c2.49±0.23a25.30±0.02d7 564±9.51d 5∶344.65±0.03d49.80±0.03e 5.42±0.02b2.39±0.11b28.60±0.03c8 320±6.00c 6∶244.67±0.10d47.00±0.01f 5.46±0.02ab2.32±0.19c30.80±0.02b11 280±10.23b 7∶145.75±0.08b42.90±0.02g5.50±0.00a2.24±0.18d33.40±0.02a13 322±8.14a猪肉质量比水分含量/%总酸度/鱼肉、（mg/100 g）pH盐含量/%氨基酸含量/（mg/100 g）
表5 鱼肉、猪肉质量比对香肠质构及感官评价的影响
Table 5 Effects of fish/pork ratio on texture and sensory evaluation of sausage
鱼肉、猪肉质量比硬度/N弹性/mm胶黏性/N咀嚼性/N感官评分1∶76.42±0.14d1.02±0.01d2.33±0.21c2.29±0.51e75.80±1.80f 2∶68.94±0.15b2.09±0.03c3.42±0.41a7.13±0.82c77.20±0.90d 3∶511.23±0.34a3.21±0.01a3.11±0.26a10.01±0.17a83.00±2.10a 4∶48.43±0.51c3.36±0.05a2.82±0.00b9.48±0.93ab80.20±0.70b 5∶39.15±0.40b2.64±0.02b2.61±0.01bc6.96±0.75cd76.00±1.30e 6∶28.17±0.22c2.86±0.01b3.80±0.09b8.49±0.60b79.00±1.20c 7∶16.34±0.21d2.24±0.02c2.15±0.03c4.61±0.21d75.30±1.90f
香肠中增加鱼糜比例后质构指标呈现先上升后下降的趋势，鱼肉、猪肉质量比接近3∶5时有较好的质构特性与感官评价，此时弹性与咀嚼性都较强，香肠具有较结实的口感，而鱼肉或猪肉过少的情况下其质构特性较差，可能是水分含量过多时影响蛋白基质，导致质构特性下降[19]。
2.1.2 分段加热温度对香肠品质的影响
分段加热温度是热加工食品的重要指标，加热可导致蛋白质变性，影响食品的品质和消化程度[20-21]。由表6可知，当一段加热温度低于90 ℃时，香肠水分含量趋于稳定，这可能是因为此温度下蛋白的网状结构锁住水分，使水分逃逸程度降低[22]，当分段加热温度为一段加热温度90 ℃、二段温度100 ℃时，蛋白质变性和收缩程度加剧，网状结构破坏，疏水基团持续暴露，导致水分迅速流失[22]，故该加热温度下香肠水分含量低于其他试验组，水分含量较低有利于减少微生物的繁殖，延长贮藏期。同时，此加热温度下香肠氨基酸含量显著高于其他试验组（P＜0.05），这可能有助于提高香肠产品的呈味特性[23-24]，该试验组水溶性蛋白含量也达到最高值，可能是该温度下游离水被充分释放使得水溶性蛋白含量测定值偏高[25]。
表6 分段加热温度对香肠理化指标的影响
Table 6 Effects of heating temperatures on physicochemical indexes of sausage
一段加热温度/二段加热温度/℃水分含量/%总酸度/水溶性蛋白含量/（µg/g）90/10039.90±0.03e92.00±1.21c5.33±0.01c1.31±0.21d44.01±1.02a5 745±26a 85/9540.15±0.26d74.70±0.48d5.37±0.03b1.31±0.75d30.81±3.21b4 187±89d 80/9040.70±0.31c59.10±1.01e5.40±0.00a1.77±0.37c28.21±2.21c5 417±37b 75/8540.86±0.78b99.80±0.41b5.36±0.15b2.04±0.26b26.01±2.01d4 355±75c 70/8040.96±0.65a11.17±1.08a5.26±0.23d2.68±0.27a22.80±0.31e4 158±32e（mg/100 g）pH盐含量/%氨基酸含量/（mg/100 g）
由表7可知，加热温度较低时其质构及感官评价不佳，可能是香肠未被充分加热，口感较差，风味物质形成不充分。加热温度较高时香肠总体弹性较好，可能是肉糜中胶原蛋白、肌原纤维蛋白和肌浆蛋白等在充分加热的情况下成为凝胶性物质，增加了肉糜的弹性[26-27]。低温下胶原蛋白转换不完全，肉糜制品弹性质量不佳，因此低温蒸煮不适合于香肠。
表7 分段加热温度对香肠质构及感官评价的影响
Table 7 Effects of heating temperature on texture and sensory evaluation of sausage
一段加热温度/二段加热温度/℃硬度/N弹性/mm胶黏性/N咀嚼性/N感官评分90/10012.14±0.36d3.38±0.45c4.15±0.13a14.01±0.57a79.60±1.60c 85/9512.23±0.18b3.41±0.54b3.93±0.54b13.33±0.57b82.60±0.80b 80/9012.42±0.22a3.67±0.24a3.87±0.47c11.25±0.16d83.00±0.50a 75/8512.17±0.23c3.26±0.73d3.73±0.63d12.22±0.64c74.10±0.70d 70/8012.16±0.29c2.11±0.61e3.61±0.57e7.59±0.49e72.10±2.10e
2.1.3 分段加热时间对香肠品质的影响
分段加热时间会影响羰氨反应，影响食品中风味物质的形成，改变食品的可接受程度[28]。由表8～9可知，因采用蒸煮方式，空气相对湿度较高，同一加热温度下加热时间对香肠的水分含量影响较小，水分含量波动范围始终保持在±1.5%，这可能是蒸煮方式使得游离水含量减少，从而增强了结合水的固定程度[29]。随着加热时间的延长，氨基酸含量和总酸度逐渐升高，延长加热时间可增加香肠的风味[16]，但长时间加热后硬度和弹性偏低，质构指标不佳，感官评分趋于下降。在一段加热20 min、二段加热60 min加工条件下感官评分达到最高值，此时水溶性蛋白含量较高，弹性等质构指标较佳。
表8 分段加热时间对香肠理化指标的影响
Table 8 Effects of heating temperatures on physicochemical indexes of sausage
二段加热时间/min水分含量/%总酸度/一段加热时间/（mg/100 g）pH盐含量/%氨基酸含量/（mg/100 g）水溶性蛋白含量/（µg/g）10/4041.45±0.21a50.02±0.81e5.32±0.02b2.87±0.03a22.91±1.02e4 134±12d 20/6041.15±0.34b61.30±0.21d5.32±0.13b2.72±0.03b32.31±1.01d5 207±46b 30/8040.00±0.36e68.70±0.31c5.34±0.46a2.32±0.02c35.21±1.11c3 491±15e 40/10040.25±0.21d84.40±0.11b5.32±0.39b2.29±0.13d38.51±3.01a4 158±35c 50/12040.50±0.15c99.40±0.08a5.34±0.46a2.19±0.06e36.40±0.41b5 592±14a
表9 分段加热时间对香肠质构及感官评价的影响
Table 9 Effects of heating time on texture and sensory evaluation of sausage
一段加热时间/二段加热时间/min硬度/N弹性/mm胶黏性/N咀嚼性/N感官评分10/4015.47±0.15d3.51±0.46a4.46±0.43d15.29±0.46c86.00±1.00b 20/6016.29±0.59c3.21±0.76c5.32±0.13c15.93±0.31b88.60±1.20a 30/8017.16±0.16b2.09±0.41e6.51±0.43b13.65±0.49e84.00±1.20c 40/10015.44±0.75d3.36±0.13b4.24±0.19e14.02±0.16d79.10±1.70d 50/12020.12±0.18a2.85±0.43d7.16±0.35a20.36±0.43a74.10±1.50e
2.1.4 盐添加量对香肠品质的影响
盐含量是影响肉制品品质的重要指标，会影响风味物质的形成[30]。由表10可知，随着盐含量的增加，渗透压作用促使肉制品内部水分迁移，蛋白质的保水性下降，导致游离水含量上升，内部水分开始析出至表面[31]。同时盐含量还会影响盐溶蛋白的含量，酸碱环境的变化可能影响蛋白聚集[32]，可能是盐含量较高时水溶性蛋白减少的原因。
表10 盐添加量对香肠理化指标的影响
Table 10 Effect of salt addition on physicochemical indexes of sausage
添加量/%水分含量/%（mg/100 g）pH盐含量/%（mg/100 g）含量/（µg/g）040.15±0.05e49.62±0.31e5.23±0.01d0.25±0.13e34.10±0.53a5 339±35a 340.75±0.09d61.60±0.21d5.32±0.05a2.92±0.21d30.02±0.66b4 946±62b 541.65±0.04c69.21±0.11c5.27±0.03b5.07±0.25c23.21±0.43c3 820±31c 843.35±0.15b79.20±0.11b5.24±0.03c7.83±0.25b20.71±0.73d2 942±42d 1048.10±0.12a90.10±0.12a5.28±0.06b9.53±0.28a14.01±0.26e2 170±15e
盐含量对肉制品的质构作用复杂，由表11可知，香肠的质构指标均呈波浪式上升。不添加食盐时硬度偏高，随着食盐添加量的增加硬度稍有下降，可能是水分含量增多而导致，当盐添加量达到5%时，其质构指标与未添加盐的试验组相比显著上升（P＜0.05）。盐含量增加引起肌动球蛋白的收缩[33]，盐添加量达到8%时，硬度有所上升，可能是食盐激活了蛋白酶，使嫩度增加，硬度下降[34]。当盐添加量达到10%时，硬度达到最高值，盐分的添加会显著影响蛋白质与水分的相互作用，从而影响水分迁移率[35]，水分从内由外转移致使内部蛋白含水量下降，这会使蛋白的正电荷与氯离子的负电荷结合，造成静电斥力及等电点的改变，使得肌原纤维基质发生肿胀，导致硬度上升[36]。在感官评价实验中，盐添加量10%时评分最高。
表11 盐添加量对香肠质构及感官评价的影响
Table 11 Effects of salt addition on texture and sensory evaluation of sausage
盐添加量/%硬度/N弹性/mm胶黏性/N咀嚼性/N感官评分012.2±0.03c3.26±0.53b3.81±0.03c12.56±0.05c63.00±2.20e 311.2±0.05d2.89±0.77d4.15±0.02b11.10±0.01d69.60±2.50d 513.5±0.05b3.36±0.23a4.25±0.04b13.86±0.02b82.00±1.50c 811.1±0.02d2.70±0.32e3.74±0.04c9.96±0.03e84.10±2.10b 1016.8±0.01a3.12±0.13c5.45±0.05a16.93±0.03a87.10±1.80a
2.2 正交试验结果
根据感官评价分析结果进行正交试验，由表12可知，通过极差分析可知，工艺条件最优组合为A2B2C1D2，即鱼肉、猪肉质量比为6∶2，食盐添加量为8%，一段加热时间/二段加热时间为20 min/60 min，一段加热温度/二段加热温度为90 ℃/100 ℃。
表12 正交试验结果
Table 12 Orthogonal array design and experimental results
编号A鱼肉、猪肉质量比B盐添加量C加热温度D加热时间感官评分1 81 2 1 2 3 280 1 1 1 1 3 80 4 2 1 3 3 83 1 3 2 3 5 88 6 2 3 1 2 79 2 2 2 1 7 283 8 3 2 1 3 82 3 1 2 9 3 3 3 1 70 K1241247245231 K2250250242251 K3234230237242 k180.3382.3380.6779.67 k283.3383.3383.6780.67 k378.3376.3377.6781.67 R5.007.006.002.00
2.3 验证实验
用上述分析所得最佳工艺条件进行验证实验，该工艺条件下所制成的香肠肠衣完整、肉质均匀有光泽、香肠呈淡红灰色、肉质紧密、富有弹性、有鲜味、咸度适中。产品感官评分为90.12 分，优于其他正交试验组的感官评分。
由表13可知，复合香肠与市售火腿肠相比质构指标差异不大，但因未添加增稠剂等食品添加剂，硬度略低于其他2 款市售香肠。
表13 最佳工艺条件下制成的复合香肠与市售火腿肠质构对比
Table 13 Comparison of texture characteristics between fish-pork sausage and commercial sausages
检测产品硬度/N弹性/mm胶黏性/N咀嚼性/N猪肉、鱼肉复合香肠20.15±0.20a3.83±0.13a5.89±0.65b15.30±0.33a市售双汇香肠20.83±0.35a3.90±0.08a5.62±0.54b15.60±0.14a市售皇上皇香肠20.56±0.25a2.89±0.23b6.42±0.54a14.10±0.26b
3 结 论
单因素试验结果表明：提高鱼肉比例时复合香肠中氨基酸含量明显上升，一段加热温度90 ℃、二段温度100 ℃下香肠水分含量低于其他试验组，氨基酸含量明显高于其他试验组；一段加热20 min，二段加热60 min加工条件下感官评分达到最高值；盐添加量达到10%时，硬度达到最高值，随着盐添加量的增加，所测水分含量和pH值趋于下降。
复合香肠的最佳工艺条件为鱼肉与猪肉质量比6∶2、盐添加量8%、一段加热时间/二段加热时间20 min/60 min、一段加热温度/二段加热温度90 ℃/100 ℃，在此工艺下香肠肠衣完整、肉质均匀有光泽、香肠呈淡红灰色、肉质紧密、富有弹性、有鲜味、无明显腥味、咸度适中。
本研究分析了加热温度、加热时间等因素对复合香肠品质的影响，但未对加热方式进行深入研究，未来以鱼肉、猪肉为原料的复合香肠研究可结合本研究结果对加热方式进行研究，探讨加热方式对肉糜蛋白的影响及风味变化。鱼肉、猪肉复合香肠的开发可以为改善香肠类产品风味、控制其脂肪含量、增加鱼糜的适用范围提供理论参考。
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